一、悬浮细胞都有什么?
悬浮生长的细胞是指在体外培养时不依赖于支持物表面,而是在培养液中以悬浮状态生长的细胞。这类细胞通常来源于血液、淋巴组织,例如某些肿瘤细胞和转化细胞。悬浮细胞的特点是细胞呈圆形,一般不贴于支持物上,易于大量繁殖。在体外培养的细胞类型中,悬浮细胞可以呈单个细胞或细小的细胞团生长。
以下是一些常见的悬浮生长细胞类型:
小鼠腹水瘤 S180
小鼠骨髓瘤 NS1 和 SP2/0
人造血系肿瘤细胞 U937、HL60、K562
人原髓细胞白血病细胞 HL-60
小鼠白血病细胞 WEHI-3
人白血病细胞 K-562
此外,还有一些工业上应用的细胞系,如 CHO、BHK、HEK293 等,这些细胞主要用于重组蛋白质生产。在兽用生物制品中,常用的悬浮培养的细胞系包括 BHK21 和 MDCK 细胞。
天津益元利康生物科技有限公司可提供种类丰富齐全的细胞系,各种细胞、蛋白、抗体,试剂,欢迎咨询哦~
二、悬浮细胞的转染
1.提一天将细胞接种6孔板,每孔细胞数约为3×105 个,
2.第二天,换液后加入1mL培养基,再加20 μL 慢病毒,
3.混匀后继续培养,
4.12h后观察细胞状态,并更换为新鲜培养基,
5.转染1周后,观察细胞生长情况,中途可以换液,保持细胞的活性。
转染(Transfection)是指将DNA或者RNA导入真核细胞中的过程。转染的目的是产生重组蛋白,或特异性增强或抑制转染细胞中的基因表达。细胞转染有哪些类型和方法呢?
1)根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短,可以分为瞬转和稳转。
瞬转 | 稳转 |
导入的DNA没有整合到基因组中,而是保留在细胞核上 | 导入的DNA整合到基因组中 |
导入的遗传物质不传递到子代; 遗传改变只是暂时的 | 导入的遗传物质能够代代相传;遗传改变是的 |
不需要选择性筛选 | 需要选择性筛选出稳定转染的细胞 |
DNA载体和RNA都可用于瞬时转染 | 只有DNA载体可用于稳定转染;RNA本身不能稳定地导入细胞中 |
导入的遗传物质的高拷贝数导致高水平的蛋白质表达。 | 单拷贝数或低拷贝数的稳定整合的DNA导致较低水平的蛋白质表达。 |
通常在转染后24-96小时内收获细胞。 | 需要2-3周的时间筛选出稳定转染的细胞克隆。 |
通常不适合使用具有诱导型启动子的载体的研究。 | 适用于使用带有诱导型启动子的载体的研究。 |
2)根据转染方式可以分为化学,生物,物理方法。
转染类型 | 转染方法 | 原理 | 应用 | 特点 |
化学转染法 | 磷酸钙法 | 磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞 | 稳转, 瞬转 | 不适用于原代细胞,操作简便但重复性差,有些细胞不适用 |
阳离子 | 带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞 | 稳转, 瞬转 | 适用性广,转染效率高,重复性好,但转染时需除血清。转染效果随细胞类型变化大 | |
DEAE-右旋糖苷法 | 带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 | 瞬转 | 相对简便、结果可重复,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清 | |
生物转入法 | 病毒介导法 | 通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中 | 稳转 | 可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等 |
逆转录病毒 | 特定宿主 | 但携带基因不能太大细胞需处分裂期,需考虑安全因素 | ||
腺病毒 | 通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中 | 瞬时转染 | 可用于难转染的细胞 | |
物理转染法 | Biolistic颗粒传递法 | 将DNA用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞,DNA在胞内逐步释放表达 | 瞬转 | 可用于:人的表皮细胞,纤维原细胞,淋巴细胞系以及原代细胞 |
电穿孔法 | 高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上形成的小孔导入 | 稳转,瞬转 | 适用性广但细胞致死率高,DNA和细胞用量大 | |
显微注射法 | 用显微操作将DNA直接注入靶细胞核 | 稳转,瞬转 | 转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞 |
天津益元利康生物科技有限公司
(一)辐射五大服务方向:
1. 国内试剂耗材经销代理;
2. 国外试剂订购(直订,或境外代理);
3. 基因组测序(二代,二代+三代);
4. 基因分型(SNP检测):低/中/中 高通量项目;
5. 生物样本运输(国内、);
(二)多家代理品牌,涉及30多种较有名品牌,经营代理500多个品牌:
Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、
Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix International Humic、biocytex、Toxin Technology、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、horizon discovery、Reagents、megazyme、elisasystems………
所有生物试剂耗材都可以进口,特别是冷门品牌,均能给客户购买到。价格优,货期短,可加急,快10天到货;保证服务质量,所有产品均提供售后服务。大部分客户我们提供货到付款服务,
公司自成立依靠过硬的服务和良好的信誉与各大企事业单位、科研单位建立长期合作。客户包括北大,清华,地大,中科院各所,各大药企等等。
专业订购国内外试剂耗材,常备现货,一手货源,欢迎合作。