慢病毒转染贴壁细胞全流程详解

一、细胞种板

将细胞种在12孔板中，每孔1.5×10^5个细胞。每孔加入1ml wan全培养基。
二、病毒感染

1. 待细胞生长至30%～50%时开始转染。
2. 将病毒从冰箱取出，放在冰上融化。
3. 打开生物安全柜，关闭风机，戴好帽子和口罩。
4. 弃去培养基，用PBS洗三次。
5. 每孔加入500ul wan全培养基。
6. 根据公式计算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）= MOI x 细胞数 / 病毒滴度（TU/mL）× 1000。

7. 4小时后，再向孔板中加入500ul wan全培养基，补足1ml。

三、换液

 感染后24小时，吸去含病毒的培养液，换上新鲜的 wan全培养液，继续37℃培养。

四、观察与筛选

感染后48小时，通过荧光显微镜初步观察GFP表达效率。一般感染后72小时达到表达高峰。
对于携带Puromycin抗性基因的病毒，换上含适当浓度Puromycin的新鲜 wan全培养液，筛选稳定转导的细胞株。

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