分析型流式细胞仪检测原理

将待测样品制成单细胞悬液，在鞘液的包裹下进入流式细胞仪内的检测区域，细胞在激光的照射下会发生散射和折射，产生的散射光信号和荧光信号由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的强度与细胞直径成正相关，可以理解为细胞直径越大，FSC越强，细胞直径越小，FSC越弱。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的大小，利用FSC值对细胞进行分群和分类。  

侧向角散射光（SSC）的强度与细胞内颗粒结构复杂程度成正相关（与细胞中所含的细胞器、细胞核等的数量成正比），可以理解为细胞内颗粒结构越复杂，SSC越强；细胞内颗粒结构越简单，SSC越弱。所以可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度，利用SSC值对细胞进行分群和分类。

当细胞通过激光束时，检测器会检测到细胞或颗粒的散射光，放置在前面的检测器检测FSC值，而放置在侧面的多个检测器检测SSC值。通过综合分析前向散射FSC和侧向散射SSC的数据，便能根据细胞大小、形状和复杂度将其进行分群分类。由于样品细胞不需要标记任何荧光化合物偶联抗体，直接上样分析得到FSC值和SSC值，其值代表细胞的大小和颗粒度两个物理特征，所以FSC-SSC散点图又称为 “物理图"。

分选型流式细胞仪检测原理

当细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。流式细胞仪除了根据FSC和SCC散射度或荧光(如DNA、RNA或蛋白含量，酶活性，特异抗原) 散射度差异来分离细胞外，更多的采用细胞表面抗原标记的荧光强度差异来分离细胞。每种细胞表面具有du te的抗原，当形态学检测难以区别时，免疫表型参数对细胞分选有决定性作用。

流式细胞术结果

荧光信号和散射光信号通过波长选择的滤光片，由相应的光电管和电子检测器接收并转换成电信号，经放大器放大后送入计算机并进行分析显示和结果输出，测定的结果常用流式直方图、流式散点图、流式密度图和流式等高线图来表示。

流式细胞术样本类型

流式细胞仪可检测多种样本：外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞、微生物。

流式细胞术应用

1.流式细胞术可以用来检测细胞表面以及胞内的各种标志，对细胞进行分群鉴定以及各种蛋白表达量高低的比较。

2.通过标记Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相关基因，流式细胞术可用来检测细胞的增殖以及凋亡。

3.流式细胞术可用来分析细胞周期。细胞核DNA含量随着细胞增殖周期时相的不同而发生变化，用DNA染料进行染色，DNA含量多，荧光信号强，DNA含量少，荧光强度低。

4.在肿瘤学研究中尤其常用，流式细胞术可以用于判断药物对肿瘤细胞影响、肿瘤的生长速度等。