更新时间：2025-01-16 
阅读：97一、流式细胞术
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）从字面意义理解，Flow—Fluid、Cyto—Cell、Metry—Measurement，是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球，细菌，小型模式生物等）逐个进行快速定量分析和分选的技术。其特点是通过快速测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收来定量测定细胞DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数。根据这些参数将不同性质的细胞分开，以获得供生物学和医学研究用的纯细胞群体。
1.流式细胞术的关键优势：
高通量：一次实验能够分析数千至数百万个细胞，几秒内完成大规模数据收集。
单细胞多参数分析：一次实验可同时测量单个细胞的多个参数，如细胞大小、颗粒性、表面标志物和内部复杂性。
数据精确度高：通过荧光信号与细胞大小等物理参数结合，提供精确的亚群分析。
2.核心应用：
免疫表型分析（Immunophenotyping）：通过荧光标记的抗体鉴定不同的免疫细胞亚群。
细胞周期分析：评估细胞群体的不同周期阶段。
细胞凋亡检测：通过标记凋亡相关分子检测细胞凋亡情况。
细胞活力检测：结合活细胞与死细胞染料，分析细胞活力状态。
二、流式细胞术原理
1. 特定波长的激光束直接照射到高压驱动的液流内的细胞，产生的光信号被多个接收器所接收，包括激光束直线方向上接收到的散射光信号（前向角散射）和激光束垂直方向上接收到的光信号（散射光信号（侧向角散射）和荧光信号）。液流中悬浮的直径从0.2-150 μm的细胞或颗粒能够使激光束发生散射，细胞上结合的荧光化合物被激光激发后能够发射荧光。散射光信号和荧光信号被相应的接收器接收，根据接受到的信号的强弱从而反映每个细胞的物理学特征。
2. 荧光的原理 是流式细胞术中的核心。荧光分子（称为荧光团，fluorophore）通过吸收外部光源（如激光）产生激发，随后回到基态时发出荧光。这一发射光信号可被检测，并用于标记不同的细胞组分，如细胞表面或内部抗原。
3. 荧光过程的三个阶段：
激发（Excitation）：荧光分子吸收激光能量，电子从基态跃迁到激发态。
激发态寿命（Excited Lifetime）：荧光分子处于激发态的时间极短，通常为纳秒级。
发射（Emission）：电子回到基态时释放多余的能量，以较低能量的光子形式发射，波长比激发光更长。
4. 斯托克斯位移（Stokes Shift）：
斯托克斯位移是指激发光的波长与发射光波长之间的差异，发射光总是比激发光的波长长、能量低。这个位移是区分不同荧光染料发射信号的基础。利用这种位移可以有效避免激发光与发射光的混淆。
5.荧光染料的选择：
荧光染料是根据它们的激发波长和发射波长来选择的。常见的荧光染料如Alexa Fluor系列、FITC、PE等，它们有不同的光谱特性，适用于不同的激光器配置。（Alexa Fluor 488 的激发波长为488 nm，发射波长为530 nm）
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| Biolegend | 139335 | Brilliant Violet 510™ anti-mouse CD64 (FcyRI) |
| Biolegend | 107628 | APC/Cyanine7 anti-mousel-A/-E Antibody |
| Biolegend | 151210 | PE anti-mouse/human Ki-67 Antibody |
| Biolegend | 103205 | FITC anti-mouse/human CD45R/B220 Antibody |
| Biolegend | 130021 | APC anti-mouse Tim-4 |
| Biolegend | 740150 | LEGENDplex™ Mouse Inflammation Panel (13-plex) with Filter Plate |
| Biolegend | 801202 | Purified anti- Tubulin β 3 (TUBB3) |
| Biolegend | 145513 | Brilliant Violet 605 anti-mouse CD185 (CXCR5) |
| Biolegend | 109110 | PE/Cyanine7 anti-mouse CD279 (PD-1) Antibody |
| Biolegend | 480172 | MojoSort™ Mouse CD146 (LSEC) Selection Kit |
| Biolegend | 480017 | MojoSort Buffer (5X) |
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