基因工程中用到的连接酶主要是大肠杆菌DNA连接酶以及T4 DNA连接酶，目前后者的应用更为广泛。T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合链上的单链切口，使两个相邻的核苷酸连接起来，在DNA修复和重组中起着重要的作用。下面让我们一起来看看NEB T4 DNA连接酶(M0202V)的产品介绍。

NEB T4 DNA连接酶可以催化双链DNA或RNA中并列的5'磷酸盐和3'羟基末端之间形成磷酸二酯酶键。这种酶将连接钝端和内聚端，并修复双链DNA和一些DNA/RNA杂交体中的单链缺口。

操作方法：

1. 在冰上的微量离心管中设置以下反应。

* T4 DNA 连接酶缓冲液应解冻并在室温下重悬。

2. 通过上下移液和微量离心轻轻混合反应。

3. 对于粘性（粘性）末端，在 16°C 下孵育过夜或室温孵育 10 分钟。

4. 对于钝端或单碱基突出端，在 16°C 下孵育过夜或室温孵育 2 小时（或者，5. 高浓度 T4 DNA 连接酶可用于 10 分钟的连接）。

6. 在 65°C 下加热灭活 10 分钟。

7. 在冰上冷却并将1-5μl反应物转化为50μl感受态细胞。

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