一、物理破碎法

1. 超声波破碎法
利用超声波的空化效应和机械振动破坏细胞膜，释放蛋白质。适用于细菌、培养细胞等，需控制功率和时间以防止蛋白质变性。

2. 液氮研磨法
通过液氮冷冻组织后研磨成粉末，结合裂解液释放蛋白质，常用于植物或动物组织（如脑、脊髓）。

3. 高压破碎法
通过高压迫使细胞破裂，适用于微生物和大规模提取。

二、化学溶解法 

1. 洗涤剂裂解法
使用SDS、Triton X-100等去污剂溶解细胞膜，适用于细胞和组织的快速裂解。

2. 尿素/硫脲变性法
高浓度尿素（8-9 M）破坏蛋白质非共价键，结合CHAPS去污剂提取疏水性蛋白，常用于双向电泳样本制备。

3. 三氯醋酸-丙酮沉淀法
通过TCA和丙酮沉淀蛋白质，去除脂类及小分子杂质，适用于植物和富脂样本。

三、盐析与沉淀法

1. 硫酸铵盐析法
通过调节盐浓度使蛋白质沉淀，操作简单且成本低，适合初步纯化。

2. 有机溶剂沉淀法
使用乙醇、丙酮等降低蛋白质溶解度，常用于去除杂蛋白或浓缩样本。

四、层析与过滤法

1. 亲和层析法
利用目标蛋白与配体（如Ni-NTA树脂、抗体）的特异性结合进行纯化，选择性高但成本较高216。

2. 凝胶过滤法
基于分子量差异分离蛋白质，适用于去除小分子杂质或分离不同大小的蛋白复合物。

 五、特殊场景提取法

1. 线粒体蛋白提取
通过差速离心分离线粒体，结合裂解液（含甘露醇、EDTA）提取膜蛋白，适用于亚细胞结构研究。

2. 细菌蛋白提取
使用溶菌酶或SDS裂解细菌细胞壁，结合离心去除碎片，常用于重组蛋白表达分析。

3. 双向电泳前处理法
针对双向电泳优化，采用尿素/硫脲裂解液和还原剂（DTT）保持蛋白质溶解性，减少电荷异质性。

六、实验优化建议

样本类型：植物组织需液氮研磨和TCA沉淀；动物组织推荐冻融循环或匀浆法。

抑制剂使用：裂解液中需添加蛋白酶抑制剂（如PMSF、亮肽素）和还原剂（DTT）防止降解。

温度控制：全程冰上操作，避免蛋白质变性或酶活性损失。

 天津益源利康生物科技有限公司为您提供各种蛋白提取试剂盒，如索莱宝叶绿体蛋白提取试剂盒、EZB 外泌体提取试剂盒等，欢迎咨询选购！