胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)在储存或使用过程中出现少量沉淀通常是正常现象,但需根据沉淀的性质和实验需求判断是否需要处理。以下是具体分析
一、沉淀的常见原因
1. 纤维蛋白原聚合:
胎牛血清中含有纤维蛋白原(Fibrinogen),在解冻或长期静置后可能形成絮状或颗粒状沉淀(肉眼可见白色絮状物)。这是最常见的正常现象。
2. 磷酸钙结晶:
血清中的钙、磷离子在低温或反复冻融时可能形成细微结晶(显微镜下可见)。
3. 脂蛋白聚集:
血清中的脂类成分在低温下可能析出,形成浑浊或沉淀。
4. 蛋白质变性:
高温、剧烈震荡或反复冻融可能导致部分蛋白质变性沉淀(通常伴随颜色变化或浑浊)。
二、如何判断是否正常?
特征 | 正常沉淀 | 异常变质 |
颜色 | 血清仍为淡黄色、透明 | 浑浊、发红或发黑 |
沉淀形态 | 白色絮状或细颗粒,可溶解于37°C水浴 | 块状、无法溶解,或伴有异味 |
细胞培养影响 | 通常不影响细胞生长 | 细胞死亡、贴壁差或污染 |
三、如何处理沉淀?
常规操作:
将血清置于 37°C水浴 中轻轻摇晃至沉淀wanquan溶解(纤维蛋白原或磷酸钙沉淀通常可逆)。
溶解后 4°C静置1小时,取上清液使用(避免吸取底部沉淀)。
过滤除菌:
若沉淀较多或实验敏感(如干细胞培养),可用 0.22μm滤膜 过滤后使用。
四、需要更换血清的情况
以下情况可能提示血清变质,建议停止使用:
1. 沉淀无法通过37°C溶解,且血清浑浊、变色。
2. 血清有明显异味(如酸败味)。
3. 使用后细胞出现异常死亡或污染。
五、如何减少沉淀产生?
1. 分装冻存:避免反复冻融,按需分装为小份(如50ml/管),-20°C保存。
2. 缓慢解冻:4°C过夜解冻,或室温静置至部分融化后混匀。
3. 轻柔操作:避免剧烈摇晃或高温环境(如长时间置于37°C水浴)。
总结
少量白色絮状沉淀(纤维蛋白原相关)是正常现象,不影响大多数实验;若沉淀不可逆、血清性状改变或影响细胞活性,则需更换新批次血清。建议选择正规品牌(如Gibco、HyClone)并严格按说明书储存!
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