前面我们在文章《为什么CCK8镜下趋势是对的，测出来的OD值却不对？？》中cue到过CCK8实验，那么CCK8具体到底是什么呢，让我们今天一起详细了解下吧~

一、CCK-8实验的基本定义与原理

CCK-8实验是一种广泛应用于细胞生物学研究的细胞增殖和毒性检测方法。其基本原理在于利用细胞内的代谢酶将无色的CCK-8试剂（Cell Counting Kit-8）中的WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒染料（Formazan dye）。这一过程依赖于细胞内的脱氢酶，且生成的甲瓒染料数量与活细胞的数量成正比。因此，通过测量甲瓒染料的吸光度，可以间接反映细胞的活力和增殖能力。

二、CCK-8实验的应用领域

1、细胞增殖测定；

2、药物筛选；

3细胞毒性测定；

4肿瘤药敏实验；

5、微生物对细胞的毒性或增殖的实验。

三、CCK-8实验的具体操作步骤

CCK-8实验的具体操作步骤包括：

实验前准备：将生长状态良好的细胞进行消化、离心和计数，然后均匀铺到96孔板中，每组设置多个平行孔。同时，在边缘孔中加入PBS以减少培养基的蒸发。

CCK-8处理：待细胞贴壁后，弃掉原有培养基，加入含有终体积1/10 CCK-8溶液的wan全培养基。然后在37℃、5% CO2、90%湿度的条件下孵育1-4小时。

吸光度测定：使用酶标仪在450nm处测定各孔的吸光度值。

计算结果：根据吸光度值计算细胞的存活率或增殖率。常用的计算公式为：细胞活力*(%)=[A(加药)—A(空白)]/[A(0加药)—A(空白)] ×100。

CCK-8实验的结果分析与解读

CCK-8实验的结果分析主要依赖于对吸光度值的测量和计算。通过比较不同处理组的吸光度值，可以评估不同药物或处理条件对细胞活力的影响。例如，在药物筛选实验中，可以通过计算细胞的存活率或增殖率来判断药物的毒性或有效性。此外，还可以通过绘制细胞生长曲线来直观地展示细胞在不同条件下的生长情况。、

四、CCK-8实验的注意事项与常见问题

在进行CCK-8实验时，需要注意以下几点：

细胞接种密度要适中：细胞密度过高或过低都可能影响实验结果的准确性。

CCK-8试剂添加量要适量：过多或过少的CCK-8试剂都可能影响吸光度值的测量。

培养时间要适当：过长的培养时间可能导致细胞死亡或过度增殖，从而影响实验结果。

测定吸光度时要确保酶标仪校准准确：酶标仪的校准准确性直接影响吸光度值的测量结果。

五、CCK-8实验优缺点

优点：

1、灵敏度高；2、操作简便；3、可重复性好；4、对细胞毒性小

缺点：

1、受细胞种类和状态的影响：不同细胞类型和状态对CCK8试剂的敏感度和特异性不同，需根据具体实验情况进行调整。

2、依赖细胞还原能力：会受到氧化还原状态、营养状况等因素的影响。

3、无法分辨细胞增殖和代谢的贡献

六、CCK-8实验在科研中的重要意义

CCK-8实验在科研中具有重要意义。它不仅可以用于细胞增殖和毒性分析，还可以应用于药物筛选、肿瘤药敏试验以及微生物对细胞毒性或增殖的测定等多个方面。通过CCK-8实验，研究人员可以更加准确地评估药物的疗效和毒性，为药物研发提供有力支持。同时，CCK-8实验还可以帮助研究人员深入了解细胞的生物学特性，为疾病诊断和治疗提供新的思路和方法。

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