一、产品介绍
【中文名称】人 γδT 细胞高效扩增试剂盒
【英文名称】Human γδT cell robust expasion kit
【编号】 CT-004
【包装规格】 2L/套
【试剂盒组成】
【预期用途】
适用于从人新鲜外周血、浓缩白细胞来源的单个核细胞以及冻存的单个核细胞在体外扩增成 γδT 细胞。
【贮藏条件与有效期】GD-I,GD-II,GD-IV 置于 2-8°C 保存,有效期为 12 个月;GD-III 置于-20°C 保存, 有效期为 24 个月,置于 2-8°C 保存,有效期则为 3 个月,并勿反复冻融; 生产日期,有效期至:见标签。
【产品特性】 γδT 细胞具有在体内快速反应的特性,在受到刺激时,会先于 αβ-T 细胞释放促炎性细胞因子 (IFN-γ 和 TNF-α 等)。γδT 细胞能够激活 NK 细胞的肿瘤细胞毒作用,与 DC 细胞互刺激成熟, APC 细胞抗原呈递的功能,激活 αβ-T 细胞的免疫效应,γδT 细胞的杀伤作用具有非 MHC 限制性, 广泛的杀瘤谱,已知对至少十几种肿瘤细胞有杀伤作用。 γδT 细胞在人外周血含量很少(1-5%),本产品能够将外周血中的单个核细胞大规模扩增成 γδT 细胞,具有扩增效率高,目的细胞百分比高的特点,起始单个核细胞经过 14 天培养,总细胞 数可以扩增约 30±10 倍左右,γδT 细胞其纯度可达 80%左右,并且全程无血清培养为基础和临床 研究使用 γδT 细胞提供一个有力的产品。
二、操作步骤
1. 第 0 天,将制备好的单个核细胞(MNC)按 1.5-2.0M cells/mL 细胞密度铺于 T-75 瓶中,加 入 GD-IV 培养基 45mL,GD-I 500μL,GD-II 100 μL,GD-III 5mL 以及浓度为 100 万 IU/mL 的 IL-2 50μL(即 IL-2 终浓度为 1000IU/mL); 注意:
1)IL-2 使用 1mL GD-IV 培养基溶解(IL-2 溶解后浓度为 100 万 IU/mL),存于 2-8°C 冰箱, 存放时间不超过两周。建议将 IL-2 溶解后分装于无菌试剂管后保存于-20°C 冰箱,使用时溶解 即可,注意不要反复冻融,且不可使用长期置于 2-8°C 的 IL-2,否则将严重影响本试剂盒的扩 增效果;
2)请勿将 GD-III 从-20°C 冰箱中取出后直接置于 37°C 中,GD-III 溶解wan全后,轻轻摇晃瓶 身,使其温度与成份均一,摇晃时,请小心避免气泡产生;
3)在细胞铺加后与第 3 天补液之前的这段时间内,尽可能不要移动培养瓶,以免使其受到温度 变动,震荡等物理因素的干扰。
2. 第 3 天(3×24h),补加 95ml GD-IV 培养基,GD-III 5mL,IL-2 100μL(即 IL-2 终浓度为 1000IU/mL)转入细胞培养袋,此时袋子含 150mL 培养液; 注意:为使更多的细胞转入到培养袋中,可先将 T-75 瓶中的细胞吹打均匀,全部转入培养袋中, 再用部分新鲜配制的培养液润洗培养瓶,并再次转入培养袋中,最后补齐培养液即可;
3. 第 5 天,往培养袋补加 150mL GD-IV 培养基,GD-III 7.5mL,IL-2 150μL(即 IL-2 终浓度为 1000IU/mL),此时袋子含 300mL 培养液;
4. 第 7 天,往培养袋补加 300mL GD-IV 培养基,剩余的 GD-III,IL-2 300μL(即 IL-2 终浓度 为 1000IU/mL),然后分成两袋,此时每个袋子含 300mL 培养液;
5. 第 9 天,分别往培养袋补加 300ml GD-IV 培养基,IL-2 300μL(即 IL-2 终浓度为 1000IU/mL), 此时袋子含 1100mL 培养液; 注意:D5-9 为细胞增殖高峰期,补液时注意根据细胞生长状态和密度添加培养基以保持细胞良 好生长状态。
6.第 11 天,分别往每个培养袋补加 400mL GD-IV 培养基,IL-400μL(即 IL-2 终浓度 1000IU/mL)
7.第 13-14 天,收获目的细胞。
注意事项:
1)在使用本试剂盒时,可先将 GD-I 与 GD-II 试剂管低速离心(如 1000g/min 离心 1min 等), 确保试剂足量;
2)由于样本之间的差异性,在按上述操作说明操作时,可根据具体细胞生长状态,调整补液时 间;
3)在使用本试剂盒时,由于样本之间的差异性,每个样本的细胞长速与诱导率存在差异。
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