一、产品简介

BrainBits小鼠小脑培养试剂盒，产品组分：1 个E18小鼠小脑、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 、1个带橡胶球的火抛光移液、1对PDL涂层盖板。

二、产品使用

（一）制剂（无菌罩室温）

1. 将6mg无菌木瓜蛋白酶（PAP 6mg）溶解于3ml THRYVE Embryonic-CaCl中，制备细胞解离液，最终工作浓度为2毫克/毫升木瓜蛋白酶。在30℃下孵育10分钟使其溶解。放入冰箱或冰中备用。组织和木瓜蛋白酶必须处于相同的温度（根据处理组织的数量，可能需要几个单位）。

2. 将80µl台普兰蓝（Sigma T8154）加入0.5ml试管中进行第9步。

（二）细胞分散（无菌罩室温）：

1. 用2ml移液管，用最少的培养基小心地将组织转移到木瓜蛋白酶上。将THRYVE胚胎wanquan移植到一个新的无菌15ml试管中

保存到步骤3。

2. 组织与木瓜蛋白酶在30℃下孵育10分钟。轻轻地旋转每2分钟或使用加热摇振板在30℃和150rpm。

3. 用2ml移液管从木瓜蛋白酶中除去带有少量培养基的组织，并从步骤1中返回THRYVE胚胎wanquan培养基。

4. 使用硅化巴斯德移液器，将组织分散不超过10倍或90%，避免产生气泡。可选：加入400µl 1mg/ml DNase I溶液（StemCell Technologies 07469）加入细胞浆液中，在室温下孵育15分钟，轻弹或旋转。

5. 让未分散的碎片静置1分钟。

6. 将含有分散细胞的上清液转移到15ml无菌管中。留下约50μl含有碎片的THRYVE胚胎wanquan体。可选用70µm滤池过滤细胞液。

7. 旋转1100rpm (200 x G) 1分钟。丢弃上清，留下含有微球的约50μl THRYVE胚胎wanquan液。

8. 分散细胞颗粒（用手指或管轻弹管底部），重悬于1ml NbActiv1™中。

9. 取20μl细胞液加入含有80μl台盼蓝（1:5稀释）的0.5ml试管中，或按实验室现行计数程序计数。

10. 使用血细胞计（计算细胞/ml）或使用当前的实验室程序计数细胞。

（三）细胞电镀（无菌罩室温）：

1. 用NbActiv1™稀释0.2ml/cm2的细胞，并以16,000个细胞/cm2或所需浓度进行板载。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%湿度（或环境O2）孵育。

3. 4天后，神经元显示轴突和树突；突触和动作电位开始于7天。

4. 每3-4天用新鲜的37℃CO2平衡NbActiv1™更换一半的培养基。

（四）可行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）冲洗两次。

2. 用15mg/ml双醋酸荧光素丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶水原液配制染料混合物，各稀释15µl，加入1.5ml HBSS（1:100稀释）。

3. 在步骤1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物（1:10稀释）。

4. 约1分钟后，使用适合荧光素荧光的蓝色激励（绿色细胞）计数活细胞。用绿色激励计数死细胞碘化丙啶荧光（小红核）。

5. 生存能力=（绿色细胞/单位面积）/（总细胞数/单位面积）或生存=绿色细胞/（绿色+红色细胞）。

三、产品目录表

BrainBits小鼠小脑培养试剂盒——天津益元利康生物科技有限公司！