一、产品简介

BrainBits小鼠全脑培养试剂盒，提供完整的培养服务，包含从新鲜组织开始培养所需的一切。E18组织用2ml含B27的THRYVE胚胎储存介质运送。立即使用组织能获得最高的细胞产量，但注意组织可在4-8°C下保存一周。这个试剂盒是研究人员为下一代研究人员提供刚刚开始的可能性的实践方法，十分适用于科研。

★产品组分：1 E18小鼠全脑、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 、1个带橡胶球的火抛光移液、1对PDL涂层盖板。

二、产品使用

（一）制剂（无菌罩室温）

1. 将6mg无菌木瓜蛋白酶（PAP 6mg）溶解于3ml THRYVE Embryonic-CaCl中，制备细胞解离液，最终工作浓度为

2毫克/毫升木瓜蛋白酶。在30℃下孵育10分钟使其溶解。放入冰箱或冰中备用。组织和木瓜蛋白酶必须处于相同的温度

（根据处理组织的数量，可能需要几个单位）。

2. 将80µl台普兰蓝（Sigma T8154）加入0.5ml试管中进行第9步。

（二）细胞分散（无菌罩室温）：

1. 用2ml移液管，用最少的培养基小心地将组织转移到木瓜蛋白酶上。将THRYVE胚胎wanquan移植到一个新的无菌15ml试管中

保存到步骤3。

2. 组织与木瓜蛋白酶在30℃下孵育10分钟。轻轻地旋转每2分钟或使用加热摇振板在30℃和150rpm。

3. 用2ml移液管从木瓜蛋白酶中除去带有少量培养基的组织，并从步骤1中返回THRYVE胚胎wanquan培养基。

4. 使用硅化巴斯德移液器，将组织分散不超过10倍或90%，避免产生气泡。可选：加入400µl 1mg/ml DNase I溶液（StemCell Technologies 07469）加入细胞浆液中，在室温下孵育15分钟，轻弹或旋转。

5. 让未分散的碎片静置1分钟。

6. 将含有分散细胞的上清液转移到15ml无菌管中。留下约50μl含有碎片的THRYVE胚胎wanquan体。可选用70µm滤池过滤细胞液。

7. 旋转1100rpm (200 x G) 1分钟。丢弃上清，留下含有微球的约50μl THRYVE胚胎wanquan液。

8. 分散细胞颗粒（用手指或管轻弹管底部），重悬于1ml NbActiv1™中。

9. 取20μl细胞液加入含有80μl台盼蓝（1:5稀释）的0.5ml试管中，或按实验室现行计数程序计数。

10. 使用血细胞计（计算细胞/ml）或使用当前的实验室程序计数细胞。

（三）细胞电镀（无菌罩室温）：

1. 用NbActiv1™稀释0.2ml/cm2的细胞，并以16,000个细胞/cm2或所需浓度进行板载。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%湿度（或环境O2）孵育。

3. 4天后，神经元显示轴突和树突；突触和动作电位开始于7天。

4. 每3-4天用新鲜的37℃CO2平衡NbActiv1™更换一半的培养基。

（四）可行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）冲洗两次。

2. 用15mg/ml双醋酸荧光素丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶水原液配制染料混合物，各稀释15µl，加入1.5ml HBSS（1:100稀释）。

3. 在步骤1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物（1:10稀释）。

4. 约1分钟后，使用适合荧光素荧光的蓝色激励（绿色细胞）计数活细胞。用绿色激励计数死细胞碘化丙啶荧光（小红核）。

5. 生存能力=（绿色细胞/单位面积）/（总细胞数/单位面积）或生存=绿色细胞/（绿色+红色细胞）。

三、产品目录表

三、代理简介

BrainBits小鼠全脑培养试剂盒——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津经济技术开发区。公司产品线涉及细胞与基因治疗、免疫学、分子生物学、细胞生物学等多个方向，专注于生命科学试剂、耗材、细胞、仪器等产品销售，经营的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam等等。我们提供质优价美的产品、及时到位的服务，努力成长为生命科学和生物技术企业的优质供应商。