食管癌3D类器官培养基产品说明：食管癌类器官培养基（ESophaqus Carcinoma Organoid Medium）是一种为促进食管鳞癌类器官体外形成和扩增而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基的*配方可以提供一个较适合的食管鳞癌类器官扩增所需营养环境，选择性地促进体外人食管鳞癌类器官的生长。

食管癌3D类器官培养基产品优势：
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤特征

(4) 药敏结果与临床数据接近

使用说明：
◉  实验前准备
（1）消化好的食管癌原代细胞悬液。
（2）15mL无菌离心管、1.5mL离心管、24孔细胞培养板、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。
（3）提前30min从4℃冰箱取出食管癌类器官培养基平衡至室温，提前从-20℃冰箱取出所需体积的基质胶冰上融化。
◉  食管癌类器官培养
（1）将消化好的食管癌细胞悬液计数，按照1-2万细胞每孔计算所需的细胞数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中，补齐预冷的DMEM/F12至所需体积。
（2）将预冷后的细胞悬液加入等体积的基质胶中轻轻混匀（全程冰上操作），然后将细胞与基质胶的混合液按照40μL/孔接种于24孔板。
（3）将接种好的培养板放入培养箱至少30min，待基质胶*凝固，然后沿24孔壁每孔缓慢加入500μL预先恢复至室温的类器官培养基，3天后镜下观察类器官形成情况，粒径大于50μm即认为类器官已经形成。
（4）每5天更换一次培养基进行培养，持续观察类器官大小，镜下观察大部分类器官大小均大于50μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。
◉  食管癌类器官收集
（1）吸去培养基，每孔加入200μL基质胶解离试剂，轻轻吹打混匀，收集至15mL离心管中。
（2）37℃解离30min（具体解离时间根据实际情况决定，以无明显大块胶状物为准），解离之后1500rpm离心3min，轻轻吸去上清，待用。
◉  食管癌类器官传代
（1）解离之后的细胞加入适量的消化酶，37℃，200rpm消化（具体时间根据类器官大小和数量决定，以无肉眼可见颗粒为准）。
（2）消化*后1500rpm离心3min，轻轻吸去上清，使用终止培养基重悬后1500rpm离心3min，加入预冷的DMEM/F12培养基进行重悬，计数，按照培养步骤操作继续培养。
注意事项：
1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
3.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。4.请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
5.样本需为食管鳞癌术中样本，且肿瘤细胞比例越高（至少>50%），培养成功率越高，不推荐用于少量样本（如内镜或者循环肿瘤细胞）的培养。
6.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。