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Lipo 2000转染步骤(6孔板)
更新时间:2025-04-02      阅读:170

一、Lipo 2000介绍

赛默飞Lipo2000转染试剂是一种多功能转染试剂,经证明可以将各种有效载荷有效地转染到各种贴壁和悬浮细胞系中。

Lipo 2000转染步骤(6孔板)

二、Lipo 2000转染步骤

1.转染前一天,胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染日密度为90-95%。细胞铺板在2 ml含血清,不含抗生素的正常生长的培养基中.2.对于每孔细胞,使用250 u无血清培养基(OPTI-MEMI培养基)稀释4.0ugDNA,轻轻混匀。

3.使用前将Lipo2000转染试剂轻轻混匀,用250 u无血清培养基(OPTI-MEM|培养基)稀释10 ul Lipo2000转染试剂,轻轻混匀。Lipo 2000稀释后,在5分钟内同稀释的DNA混合(<30分钟)NOTE:若使用DMEM培养基,则需在5分钟内同稀释的DNA混合。

4.混合稀释的DNA(第二步)和稀释的Lipo 2000(第三步)。室温放置20分钟。

5.(optional)6孔板中的旧营养液吸出,用无血清培养基清洗两次。加入2 ml无血清配养基。

6.直接将复合物加入到每孔中,摇动培养板,轻轻混匀。

7.37℃5%CO2中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性,

8.在细胞中加入复合物24-72小时后,分析细胞抽提物或进行原位细胞染色,检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达,在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中,两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。贴壁细胞的稳定转染:

转染后24小时,将细胞以z1:10的比例传代至新鲜培养基中,次日加入选择性培养基

三、Lipo2000购买渠道

赛默飞代理——天津益元利康生物科技有限公司公司产品线涉及细胞与基因治疗、免疫学、分子生物学、细胞生物学等多个方向,专注于生命科学试剂、耗材、细胞、仪器等产品销售

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