标题:化学转染分类及介绍
一、转染
转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。
二、化学转染
1.阳离子脂质体
【原理】带正电荷的脂质体(由磷脂、胆固醇等组成的具有脂质双分子层结构)依靠静电作用与DNA形成DNA-脂质体复合物,通过细胞的内吞作用进入细胞.
【优点】操作简便
适合转染各种细胞
对DNA浓度有一定要求
重复性好,但转染时需除血清
【缺点】需进行条件优化(一些细胞对阳离子脂质体较敏感)
有些细胞系不容易转染
血清的存在干扰复合物的形成,导致低转染效率
2.阳离子聚合物(如聚乙烯亚胺(PEI))
【原理】带正电的聚合物与DNA形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过内吞作用进入细胞
【优点】不含疏水部分而wan-quan溶于水
可进行化学修饰
不像脂质体一样破坏细胞结构
浓缩DNA,将DNA运送到细胞内,并其在细胞核内释放
细胞毒性很低,高效
不被血清清除
【缺点】不能生物降解(树枝状大分子)
只限于瞬时转染
3.磷酸钙法
【原理】磷酸钙能够促进外源DNA和细胞的结合,磷酸钙-DNA复合物能够附着到细胞表面,并通过内吞作用进入细胞
【优点】操作简单
对DNA浓度要求高
【缺点】对pH值敏感,需仔细制备试剂
适用性有局限(不适用于原代细胞和悬浮细胞)
不能采用RPMI培养基(含有高浓度的磷酸盐)
三、Polyplus转染试剂
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