百奥益康人脑组织通用解离试剂盒该怎么使用呢？快来收看本期内容。

一、人脑组织通用解离试剂盒简介

本产品适用于人脑组织的细胞悬液的分离制备,本产品利用酶温和、快速有效地破坏细胞外基质，释放细胞，从而生成单细胞悬浮液。制备的单细胞悬液可用于单细胞测序、细胞培养或其他细胞相关检测。

二、人脑组织通用解离试剂盒使用说明

【使用方法】

准备工作:水浴锅或杂交炉设置到37℃、配制含5%FBS的PBS新鲜组织约200mg(黄豆粒大小)，如图1.

1.取一个5mL离心管，加入 2160μLBuferA,放入用 PBS 清洗干净的组织样本，并剪碎。

2.添加800μL的EnzymeB和10μ的Enzyme C，颠倒混匀。

3.放在 37℃水浴锅或杂交炉中 20~30min。消化过程中,使用水浴锅每隔3~5min 手动摇晃混匀，使用杂交炉转速20~30转/分钟左右。

4.每隔3~5min质检一次细胞悬液，根据细胞总量及活性等确定消化停止时间5.消化完成后，用 70 μm 细胞筛进行过滤，收集滤液于新的15 mL离心管中。6.加3mLRPMI1640培养基或5%FBS的 PBS 于消化的离心管中，上下颠倒涮洗管壁涮洗液同样经过同一个 70μm 细胞筛进行过滤，收集滤液于第5步的15 mL 离心管中7.将收集液于4℃，300xg离心5min，弃上清

8.用5mL含5%FBS的PBS重悬沉淀，吹打混匀.

9.放入水平离心机，4℃，300xg离心5min，弃上清

10.用含5%FBS的 PBS 重悬沉淀至 2mL.

11.加入1mLDRS(细胞碎片去除缓冲液)，用5mL移液器缓慢吹打混匀10次。不要涡旋振荡。

12.缓慢加入3mLPBS，轻轻覆盖在最上层，千万不要混匀，如图2.

13.务必使用水平离心机，并设置为居中的加速度和减速度，4°℃，3000xg，离心 20 min

14.离心后，缓慢取出离心管。溶液分成3层。缓慢吸出全部上清液(优先吸出碎片层)保留细胞沉淀(上清尽量去除干净)，如图3和图4.注:离心管要轻拿轻放，确保分层明显，不同层的溶液间不互相混合

15.向沉淀中加人适当体积的含5%FBS的PBS,加人三倍体积的红细胞裂解液(BA3311).

冰上裂红5min。具体可以参考BA3311红细胞裂解液说明书。

16.加入等体积的 PBS混匀，终止裂红，4℃，450xg，离心5min，弃上清

17.用10mL含5%FBS的 PBS重悬沉淀，吹打混匀.

18.4℃，300xg离心5min，弃上清.

19.用50μL~2mL 含5%FBS的 PBS 重悬沉淀,根据所需的细胞浓度调整重悬液的体积。20.若有明显细胞结团，则使用 20μm细胞筛进行过滤，收集滤液于新的离心管中。若无明显细胞结团，则可跳过此步骤.

21.用细胞计数仪对细胞悬液进行质控并记录，质控结束后请立即进行后续实验。