问充质干细胞(MSC)是一种源自中胚层的多能干细胞，能够从骨、脂肪、脐带、胎盘、脐血、皮肤等多样的组织里分离获取，具有强大的增殖能力和多向分化潜能，不仅能分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等，还能分化为肌细胞、肝细胞、胰岛细胞等多种细胞类型。间充质干细胞在组织工程、基因治疗和免拉治疗等诺多方面展现出巨大的应用前景，为医学领域带来了新的希望和突破方向，对于多种疾病的治疗和研究都有着重要意义。

一、小鼠脂肪组织获取

1.3天龄到4周龄(推荐小周龄)小型，颈椎脱白法处死后于75%酒精浸10min。

2.将小鼠横向，背面朝上放置，背部中心婴向剪开皮肤1cm;沿着开口处撕去腹股沟皮肤，暴露对称的腹股沟部位白色胎肪组织，钝性剥离。

二、胎肪MSC分离培养(酶消化法)

1. 消化:取脂肪组织25mL，4°℃ PBS冲洗3次，去除筋膜及红细胞，眼科剪剪碎，4°CPBS冲洗3次，每5mL脂防分装入50mL离心管，加入2倍体积的0.075961型胶原，37℃恒温摇床以80r/min的摇速震荡消化1h，待充分消化后，加入与酶等体积的含10%FBS的DMEM-F12完quan培养基终止消化。

2. 离心与计数:300g，离心10min，去除上层未消化的脂肪组织、油脂及中层洁液，5mL红细胞裂解液重悬沉淀，室温静置5min，200g，离心5min，去除上清液，完quan培养基重悬沉淀，200日网过滤后，取样计数，根据计数结果调整细胞浓度，最终以(1-5)x101/cm2接种于培养皿中，置于37℃℃，5%C0,培养箱中培养。

3. 接种培养:48h后换液，之后每3d换一次液，待细胞生长至80%-90%融合时，用体积分数0.25%肤蛋白酶消化后按1:2传代培养。

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