一、传代培养

传代培养是指需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。传代培养中的细胞传代培养（subculture），当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。

二、RAW264.7细胞传代步骤

在进行RAW264.7细胞传代时，首先需要将旧培养基弃去，并使用PBS洗涤细胞1-2次，确保细胞表面干净。然后向培养瓶中加入2 mL PBS，使其浸润所有细胞，轻轻吹打细胞以将其吹下，将细胞悬液收集至无菌离心管中。使用1000 rpm的离心速度离心5分钟，弃去上清液，再加入1-2 mL培养基并充分重悬细胞。

接下来，将悬液按1:2的比例进行传代至新的培养皿或培养瓶中，并将其置于培养箱中进行培养。通过这些步骤，可以有效地进行RAW264.7细胞的传代操作，促进细胞的增殖和持续生长，以维持细胞系的活力和稳定性。传代是细胞培养中的重要步骤，有助于确保RAW264.7细胞在研究中的连续性和稳定性。

三、RAW264.7细胞冻存具体步骤

1. 首先需要收集细胞并将其转移至无菌离心管中。使用1000 rpm的离心速度离心5分钟，将上清液弃去。

2. 随后，向细胞中添加1 ml细胞冻存液（包含20% FBS的培养基和10% DMSO），轻轻吹打混匀，将1 ml细胞悬液吸取至冻存管中，并做好详细的标记。

3. 将冻存管置于梯度降温冻存盒中，并将其放入-80℃冰箱中过夜，确保冷冻过程缓慢进行。

4. 随后，将已冻存的细胞转移至液氮罐中进行长期储存，以确保细胞的保存和使用。通过这些步骤，可以有效地进行RAW264.7巨噬细胞的冻存，以供日后实验或应急需求使用。

四、推荐使用产品

冻存液推荐：WAKO无血清冻存液

实验中会用到的PBS推荐：