一、准备工作：6孔板,marker笔,直尺,无血清培养基,完quan培养基,PBS,离心管,胰酶。

二、实验步骤：培养板划线一计数一铺板一细胞划线一清洗一培养并观察一结果分析
1.使用marker笔在6孔板背后，用直尺均匀地划横线，每隔0.5~1cm划一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线。
2.通过胰酶消化细胞制备细胞悬液。细胞计数后铺板，确保每组细胞铺板密度一致，一般在孔内接种约5-10×105个细胞（可根据细胞的生长速度调整接种数量）。

3第二天，使用移液枪枪头（20ul），与细胞平面垂直，在细胞层上沿着marker笔印记进行划痕（画十字）。

4.划痕完成后，吸取旧培养基，然后使用无菌PBS洗涤细胞3次，洗去划痕下的细胞，使留下的间隙肉眼可见清晰。接着加入新鲜无血清或低血清（<2%）的培养基，使用显微镜拍照，作为对照组。

根据需要设立实验组和对照组。对于不需要药物的空白对照组，只需添加等量的无血清培养基即可；而药物干预组则需加入含药物的无血清培养基。

5.首先需将细胞置于37℃、5%CO2的培养箱中进行培养。接着，在不同时间点（如0、6、12、24小时），取出细胞进行显微镜观察，并拍照记录。

6.划痕实验的数据分析，通常有两种主要方法：
第一种是根据细胞的迁移距离进行统计。这一方法通过比较初始划痕线与后续观察点的划痕距离来评估细胞的迁移能力。
第二种方法是通过划痕面积来进行分析。这种方法则通过对比初始划痕线与后续观察点的划痕面积来评估细胞迁移的情况。在进行数据统计分析时，这两种指标都可以被有效地使用来评估细胞的迁移能力。

三、PBS推荐

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