一、动物原代细胞

动物原代细胞是通过机械或酶的方法，或两者的结合，直接从动物组织中分离和纯化出来的。它们通常携带来自特定组织(如脑、肝、胰腺、肺、心肌、肾、乳腺、前列腺、睾丸、甲状腺、胃、小肠、结肠、骨骼肌、脂肪组织和皮肤)的原始动物细胞的所有特征。动物原代细胞可以从健康或患病的动物身上提取，在组织移除之前不需要进行其他实验。

一旦目标组织在无菌条件下被消化和解剖，将被过滤和离心进一步纯化，重悬的原代细胞将被计数并用冷冻保存培养基冷冻保存或用其有利的天然(由天然存在的生物液体组成，如血浆，组织提取物等)或人工培养基(由必需氨基酸，维生素，盐，血清，碳水化合物，辅助因子等)在孵育前为其正常生长所需，培养基将在几小时后根据特定细胞类型进行更换。例如，图1显示了从小鼠肝脏中分离和纯化原代肝细胞的过程。在这种条件下纯化的动物原代细胞被命名为传代0 (P0)，它们既可以在冷冻瓶中作为库存短时间冷冻保存，也可以直接在培养瓶中交付给我们的客户。

到目前为止，AcceGen提供了900多种不同的动物原代细胞用于研究，提供了各种各样的原代细胞，包括小鼠原代细胞、大鼠原代细胞、牛原代细胞、猴原代细胞、兔原代细胞、猪原代细胞和其他原代细胞，包括来自绵羊、鸟类、鸡、豚鼠、火鸡、马、山羊和猫的原代细胞。此外，我们的动物原代细胞也涵盖了许多不同的菌株。例如，AcceGen提供的小鼠原代细胞包括但不限于CD1、ICR、BALB/c、B129、CF1、C57BL/6、B6129SF2/J、C57BLKS/J和DBA/2菌株。

二、贴壁vs.悬浮

动物原代细胞既可以作为贴壁培养物生长，也可以保持悬浮状态。贴壁细胞依赖于锚定，并以单层形式增殖，需要附着在固体或半固体底物上才能增殖。贴壁动物原代细胞在细胞外基质的帮助下粘附在培养容器上，这些细胞通常来自于不动的组织，存在于结缔组织网络中，例如上皮细胞和成纤维细胞。由于这种培养血管的底部覆盖着一层单细胞厚度的连续细胞，因此它们也被称为单层培养。大多数动物原代细胞以贴壁培养的方式生长。由于它们是单层生长的，因此在培养维护时可以方便地将其直接转移到盖玻片上，并在后期的实验中在显微镜下进行检查。

悬浮细胞，也称为非贴壁或锚定独立细胞，不附着在培养容器表面。相反，它们在培养液中漂浮生长。悬浮细胞可以维持在没有经过组织培养处理的培养瓶中。然而，为了保持足够的气体交换，培养基可能需要搅拌，这通常是用磁力搅拌器或旋转旋转烧瓶来实现的。此外，与贴壁动物原代细胞相比，悬浮动物原代细胞更容易传代，生长速度更快，它们也不需要与胰蛋白酶或胶原酶解离，尽管每日细胞计数和活力测定可能需要遵循它们的生长模式。造血干细胞(来源于血液、骨髓或脾脏)和神经干细胞是悬浮原代细胞的两个例子。

三、动物原代细胞的优势

虽然动物原代细胞的寿命有限，但它们为研究人员提供了一些du特的好处。首先，由于动物原代细胞无需实验室修饰即可密切反映体内条件，因此它们是在体内研究细胞生物学功能的替代方法。作为人类系统的模型，动物原代细胞可用于检查广泛的疾病机制，并在将结果应用于人类之前评估新的治疗方法。动物原代细胞培养的理化和生理条件都是可调节的，如培养基的pH、温度、O2/CO2浓度、渗透压等。这样的研究为了解广泛的人类疾病提供了关键的见解。另一方面，对来自不同动物的分离细胞进行体外培养也有助于加深对不同细胞的不同功能和运作机制的理解。不同物种间细胞代谢的研究和细胞生理生化的研究就是很好的例子。此外，动物原代细胞也可以作为细胞毒性测定的重要模型。例如，可以研究各种药物或化合物对特定细胞类型(如神经元细胞或肝细胞)的作用。来自神经、肝脏、胰腺、肺、心脏、肾脏、胃、肠、骨骼、脂肪、皮肤和眼部系统的动物原代细胞都是生物医学研究和药物发现中常用的模型。此外，通过使用动物原代细胞，可以避免在实验中使用动物的伦理、道德和法律问题。 

为了进一步阐述动物原代细胞的du特优势，表1特地总结了原代细胞培养和连续细胞系之间的不同特征。

与原代细胞培养相比，连续细胞系具有无限数量的细胞代。它们在培养物中生长得更快，细胞密度更高。此外，由于连续细胞培养具有不朽性和致瘤性，它们没有接触抑制，失去了增殖的限制。它们通常以多层或悬浮的方式生长，具有在大规模生物反应器中培养的潜力。然而，与动物原代细胞相比，连续细胞系的主要缺点是染色体不稳定、表型变异以及与供体组织相关的特异性和特征性标记物的变化[4]。因此，连续细胞系不能代表动物原代细胞的体内状态。

四、结论

直接从动物组织中分离的动物原代细胞保持了许多重要的标志物和体内功能。然而，它们中的大多数具有有限的寿命和有限的扩增能力。因此，始终使用低传代的动物原代细胞至关重要。尽管一些动物原代细胞类型，比如神经元，甚至不具备分裂能力。

值得一提的是，动物原代细胞从来都不是100%纯的，所以使用的细胞传代越高，被污染的细胞生长超过目标细胞的风险就越大。同时，即使对于一些可以比其他细胞传代次数更多的原代细胞类型，每次传代总是会发生表型和遗传变化。这些遗传变化随后会导致表观遗传变化。因此，我们强烈建议客户尽可能早地使用动物原代细胞传代，以防止遗传漂变。

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