ELISA是分子生物学、免疫学和细胞生物学研究中常用到的实验操作之一，相信大家常常会有这样那样的实验问题。下面让我们一起来看看ELISA实验的常见问题都有哪些吧！
 

　　1. 洗板不干净
 

　　解决方法：
 

　　①充分洗涤：如果洗板的时间不够，会导致抗体残留，阴性对照会显色，尝试延长洗板时间，增加洗板频率，在洗液中添加表面活性剂Tween-20。
 

　　在洗板时要保证每步都洗涤干净，充分拍板直至孔内没有明显的残留液体。
 

　　②避免交叉污染：弃去洗液和孵育的抗体时避免交叉污染，移液枪头尽可能一次性使用，拍板的滤纸不要反复使用。
 

　　2. 显色液变质或者试剂过期
 

　　解决方法：检查试剂盒有效期，或使用新的试剂盒并按照说明书要求保存试剂盒。每次用剩下的显色液最好不要回收，或者只回收洗净的容器装的显色液。
 

　　3. 试剂稀释有误，检测抗体/酶结合物工作液浓度过高
 

　　解决方法：按照说明书推荐的稀释倍数稀释抗体。
 

　　4. 试剂盒组分未平衡
 

　　解决方法：试剂盒每个组分都需要平衡至室温后进行实验。
 

　　5. 混用其他试剂盒试剂
 

　　解决方法：保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验，不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象，不同批号的试剂不要混用。
 

　　6. 蒸馏水受酶等污染
 

　　解决方法：使用新鲜蒸馏水。
 

　　7. 培养箱温度超过37℃或反应时间过长
 

　　解决方法：孵育时间过长、温度过高可能会导致非特异性结合增加，从而造成本底增高。检查恒温箱，确保孵育温度稳定在37℃，按照说明书的反应时间进行孵育。
 

　　8. 酶标板底部有污渍
 

　　解决方法：在加完终止液之后，检测之前，用75%乙醇浸润的脱脂棉球擦拭酶标板底部，确认没有污渍之后再检测。
 

　　9. 洗液被污染
 

　　解决方法：洗液现配现用，长期放置会析出，也可能会污染，导致背景偏高。
 

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