polyplus转染试剂INTERFERin®在1nM siRNA下已经提供了非常高的沉默效率,并且可以用于多种粘附细胞和悬浮细胞。使用低浓度的siRNA可以避免脱靶效应,其温和的作用模式确保了更可靠的数据和优异的细胞活力。由于与血清和抗生素的兼容性,INTERFERin®易于使用,也非常适合转染miRNA和其他寡核苷酸,如pre-miRNA、mimic miRNA等。
产品优势:
一、更少的siRNA,更少的脱靶效应
一些出版物表明,转染低浓度的siRNA可以避免脱靶效应。事实上,当以高浓度转染siRNA时,可以观察到这些不想要的非特异
性副作用。因此,可以通过使用尽可能少的siRNA来提高实验数据的可靠性。这就是为什么INTERFERin®被专门设计为使用
低siRNA浓度提供高沉默效率的原因。
INTERFERin®介导的1 nM特异性siRNA的递送显示出对基因表达的选择性和高效敲低,而竞争对手(L2K)至少需要
10 nM siRNA才能达到50%的沉默效率(图1)。
图1:INTERFERin®只需要1 nM siRNA即可实现有效的基因沉默。根据制造商的建议,使用INTERFERin®或竞争对手L2K用抗-Luc siRNA转染稳定表达萤火虫萤光素酶的3LL细胞。48小时后使用常规测定法测量萤光素酶的表达。对照siRNA未观察到抑制作用。
令人惊讶的是,在10pM的siRNA下仍然实现了50%的沉默(图2)。
图2:即使在极低的siRNA浓度下,INTERFERin®也是高效的。A549-GL3Luc细胞在血清存在下使用INTERFERin®转染,并降低抗-Luc siRNA的浓度。48小时后使用常规测定法测量萤光素酶的表达。对照siRNA未观察到抑制作用。
用INTERFERin®转染靶向内源性层粘连蛋白A/C的1nM siRNA可将层粘连蛋白基因表达显著降低至几乎无法检测的水平(图3)。
图3:用INTERFERin®转染1nM siRNA导致有效和特异的基因沉默。使用INTERFERin®用1nM层粘连蛋白A/C siRNA转染CaSki细胞。48小时后,通过免疫荧光显微镜测定层粘连蛋白A/C沉默效率。
二、适用于miRNA转染microRNA(miRNA)寡核苷酸的转染越来越多地被用于分析特定miRNA对细胞功能的生物学影响。INTERFERin®是递送
miRNA、miRNA模拟物或前miRNA的首xuan试剂。
INTERFERin®是最新一代siRNA和miRNA转染试剂,特别设计用于在多种细胞中实现高转染效率,从而实现高基因沉默或刺激
基因表达。事实上,一些miRNA也已知通过与感兴趣基因的启动子结合来诱导基因表达。例如,INTERFERin®介导的miR-373
的递送导致E-钙粘蛋白表达增加3倍(图4)。
图4:用INTERFERin®转染miR-373增强E-钙粘蛋白的表达。将PC-3细胞接种在6孔板中,并用miR-373(25 nM)转染,每孔使用8µl的INTERFERin®。转染后72小时,通过RT-qPCR测定E-钙粘蛋白mRNA的表达水平。用HPRT-1基因表达对测定进行标准化。
INTERFERin®的阳离子组分只需要很少的寡核苷酸量,从而实现温和的转染过程。此外,简单而稳健的协议确保了可重复的结果。像miRNA这样的寡核苷酸可以用少量的INTERFERin®转染,从而导致强烈的基因沉默或刺激基因表达。无论使用何种浓度的INTERFERin®,效果都大致相同,使INTERFERin®成为一种经济的试剂。例如,使用不同体积的INTERFERin®的折叠变化始终在1.5和1.8之间(图5)。
图5:INTERFERin®在非常低的量下已经很有效。将PC-3细胞接种在6孔板中,并使用4、6或8µl/孔的INTERFERin®用miR-373(10nM)转染。转染后72小时,通过Western印迹分析E-钙粘蛋白的表达。使用β-肌动蛋白表达对测定进行标准化。以对照情况为参考来表示量化。
与高细胞活力相关的高转染效率使INTERFERin®成为为科学出版物生成相关数据的首xuan试剂。事实上,自推出以来,使用INTERFERin®研究miRNA和miRNA相关分子的出版物数量呈指数级增长(图6)。
图6:INTERFERin®参与了越来越多关于miRNA转染的出版物。
三、超过90%的基因沉默
对于许多贴壁细胞系或原代细胞,1nM的siRNA足以获得90%以上的基因沉默。对于悬浮细胞系,使用5nM siRNA的INTERFERin®仍然可以达到80%的沉默(表1)。
表1:用INTERFERin®成功转染的细胞系和获得的沉默效率。
四、卓yue的细胞活力
在细胞活力方面,INTERFERin®优于其他转染试剂。用1nM siRNA转染48小时后,用INTERFERin®转染的细胞看起来是健康的,而用试剂可以清楚地观察到毒性(图7)。
图7:INTERFERin®对细胞极为温和,如使用INTERFERin®或竞争试剂转染siRNA 48小时后细胞形态的比较所示。A549-GL3Luc细胞在血清存在下,使用INTERFERin®或竞争对手S或H,根据制造商的方案,用1nM萤光素酶siRNA转染。
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